SDS-PAGE

SDS-PAGE é uma técnica comum de electroforese em gel para a separação de proteínas na massa molecular. É de proteína de pré-tratamento com um detergente chamado de dodecilsulfato de sódio (SDS), o que lhes desnatura (ou seja, perdem a sua estrutura). Mercaptoethanol é outro pré-tratamento comum, mas destrói todos os pontes dissulfeto na posse de subunidades da proteína juntos.

Após o pré-tratamento, os investigadores adicionar proteínas para a laje de gel de poliacrilamida e a aplicação de um campo eléctrico. Uma vez que o SDS carregado negativamente forma um complexo com as moléculas de proteína, irá migrar para o pólo positivo. As moléculas maiores migra mais lentamente, em seguida, este processo separa as proteínas com base na massa.

Focalização isoelétrica 

Focagem isoeléctrica é baseada nas diferenças de ponto isoelétrico, ou o pH ao qual a proteína possui uma carga global, às proteínas separadas. Tratar um tubo estreito de gel de poliacrilamida com tampões especiais cria um gradiente de pH, de modo que uma extremidade do tubo está a um pH elevado e a outra está a um pH baixo.

Quando submetido a um campo eléctrico, cada proteína na amostra migra através do gel, até atingir um pH ao qual nenhuma carga líquida, neste momento, o campo eléctrico não pode ser accionado de qualquer outra. Desde que as proteínas têm diferentes pontos isoelétricos, focalização isoelétrica é uma forma eficaz para separar as proteínas.

PAGE 2-D

Electroforese PAGE 2-D é uma combinação de SDS-PAGE e focagem isoeléctrica. A primeira fase envolve a separação das proteínas por focagem isoeléctrica, a segunda consiste em posicionar o gel a partir do topo de uma outra placa de gel de focagem isoeléctrica de fase, tratando as proteínas com SDS, e a aplicação de um campo eléctrico.

Assim, 2-D PAGE separa proteínas ambos ponto isoeléctrico e peso molecular, para formar uma 2-D "mapa" das proteínas na amostra.

Electroforese em gel de agarose

Cientistas geralmente separar fragmentos de ADN usando gel de agarose, em vez de gel de poliacrilamida. A agarose é um pó de amido extraído de algas. Misturando-o com um tampão e aquecer no microondas cria um gel espesso que se solidifica quando esfria, e, em seguida, cria um pente de amostra "poços" do gel, que detêm as amostras de proteínas.

Electroforese em gel de agarose é comum em impressão digital de ADN, e também no comprimento de fragmentos de restrição de ensaio de polimorfismo (RFLP), a segunda é uma técnica antiga que envolve cortar o DNA em fragmentos utilizando enzimas de restrição (enzimas que fazem cortes em sequências particulares) , e separa-los em função da sua dimensão.

Seqüenciamento de DNA

A maioria dos métodos de sequenciação de DNA envolve a eletroforese em gel de poliacrilamida. Neste processo, os investigadores incubar várias cópias de um padrão de ADN de cadeia simples com nucleótidos (os blocos de construção para a síntese de ADN) e da polimerase do ADN (uma enzima que se replica de DNA).

Quando alguns nucleótidos alterados quimicamente se ligar à extremidade de uma cadeia em crescimento de nucleotídeos do DNA, que terminam em cadeia; esses nucleótidos são chamados de corrente especial encerra didesoxinucleótidos. Existem quatro tipos de didesoxinucleótidos, cada um dos quais tem uma cor diferente do corante fluorescente.

À medida que a polimerase de ADN de fazer cópias de ADN molde de cadeia simples, ocasionalmente introduzir um didesoxinucleótido em lugar de um nucleótido normal. Uma vez que isto acontece em locais diferentes para diferentes cópias do modelo, a mistura resultante contém cópias parciais do que final original em diferentes locais, e, portanto, têm diferentes comprimentos.

Subsequentemente, a electroforese em gel de poliacrilamida separa os fragmentos com base no tamanho, e um detector especial identifica o corante fluorescente do didesoxinucleótido na extremidade de cada cadeia. A ordem pela qual estes corantes aparecem revelar a fim de nucleótidos no ADN molde original e, em seguida, a sequência de DNA original.