Educação Os plasmídeos

Começando na parte superior da imagem, medir a distância de cada banda na pista "standard" do gel (aka a escada). A faixa padrão contém pedaços de DNA cujo tamanho já é conhecido, então você já deve saber o tamanho de cada antes de iniciar o experimento. Também medir a distância percorrida pelas bandas em cada uma das pistas de amostra.

Dividir a distância de cada padrão e de cada banda nas amostras percorrido a distância a partir do fundo do gel. O resultado é dito mobilidade relativa. Você pode usar a planilha para fazer a média aritmética para você, se você vai fazer isso rápido ritmo.



Digite a mobilidade eo tamanho de cada padrão relativo no seu programa de planilha, use o programa de planilha ferramenta gráfica para criar um gráfico de dados com mobilidade relativa no eixo xey dimensões.

Coloque uma linha para o gráfico por meio de regressão linear. Consulte a seção de Ajuda do programa de planilha, se você precisa saber como fazer isso. Você deve acabar com uma equação, talvez um semelhante ao seguinte:

y = (0,3) x ^ -2.5

Note-se que x é aqui a mobilidade relativa, enquanto y é o tamanho. Deve notar-se que a equação pode ter os números completamente diferentes para o expoente e o coeficiente - esta equação é simplesmente fornecido como um exemplo hipotético.

Tome a mobilidade relativa das bandas do seu exemplo como x e conectá-lo a calcular o tamanho dos pedaços de DNA nas bandas da amostra.

Suponha-se que a equação derivada do programa de folha de cálculo foi, de facto, y = (0,3) x ^ -2,5, e a mobilidade relativa de uma determinada banda de amostra foi de 0,68. Substituindo a equação 0.68, é o seguinte:

y = (0,3) (0,68) ^ -2.5

Usando a calculadora, sobe para 0,68 -2,5 e encontramos o seguinte:

y = (0,3) (2,62)

y = 0,786

que seria, então, o tamanho estimado em quilobases de ADN de uma das bandas da amostra.

Note que você pode ou não ser necessário usar as instruções nesta seção. A electroforese em gel de agarose é frequentemente utilizado para confirmar que um plasmídeo contendo uma determinada inserção. Se você não está trabalhando com plasmídeos, você pode pular esta seção. Se você, no entanto, você pode seguir estas instruções.

Note que se você estiver trabalhando com plasmídeos cortado ou danificado, não é possível estimar o tamanho usando o procedimento a partir do passo 1 acima. Isto porque plasmídeos sem cortes e arruinado migrar a taxas diferentes de DNA linear.

Comparar o número de bandas em cada pista. Recorde-se que uma enzima de restrição corta o DNA em locais em que ocorra uma determinada sequência de chamada de um local de restrição. Se a amostra foi tratada com duas enzimas de restrição, de uma banda para a inserção e uma banda para o resto do plasmídeo deve estar presente simultaneamente. Isto é porque o inserto é flanqueado por dois locais de restrição, cada uma para uma enzima diferente, de modo que os cortes em ambos os locais de libertar a inserção do plasmídeo. Um corte em apenas um local, pelo contrário, irá converter o plasmídeo de DNA linear. Um corte de amostra sem enzimas de restrição ou de enzimas de restrição, portanto, deve apresentar apenas uma banda, enquanto uma amostra cortada com duas enzimas de restrição deve ser caracterizado por duas bandas.

Cuidado com as bandas criadas por plasmídeo DNA cortado. Um plasmídeo cortado tem um corte em um único fio, de modo que migra mais lentamente do que um corte de plasmídeo. Plasmídeos Corte, por sua vez migrar mais lentamente do que o DNA intacto.

Estimar o tamanho da inserção utilizando o procedimento descrito na Seção 1 e determinar se ele atende às suas expectativas (que variam dependendo da experiência.)