História

Em 1948, Sir John FW Herschel descobriu fluorescência do quinino, a primeira fluorophore conhecida. Ele observou brilhante solução azul de sulfato de quinina. Em 1852, Sir George Stokes, um professor na Universidade de Cambridge, descobriu que a fluorescência ocorre em um comprimento de onda de absorção (deslocamento Stokes). No período de 1930-1980 Professor A. Jablonski conduziu estudos fundamentais de fluorescência de que para desenvolver sua teoria (diagrama de Jablonski) ea descoberta da anisotropia de fluorescência.

Teorias/especulação

Moléculas em temperatura ambiente ocupam o estado fundamental. A absorção de energia na forma de luz de excitação faz com que a molécula na forma de transições de electrões a partir do solo, para uma sub-camada do estado animado. Estas transições ocorrem em femtoseconds. Conversão interna leva rapidamente relaxante molécula (em picossegundos) para o menor subnível do estado animado. Desde o tempo de vida de fluorescência é mais do que um nanossegundo, conversão interna completa antes da fluorescência (emissão), que sempre tem uma energia menor do que a absorção inicial.

Instrumentação 

Ferramentas de fluorescência (SPECTROFLUOROMETERS) compreende uma fonte de luz, um suporte de amostras e um detector. A fonte de luz é geralmente uma lâmpada de xénon de alta pressão que fornece energia de luz entre 250 e 700 nm. Charge-coupled device (CCD) detectores contendo até 1 milhão de pixels proporcionar alta sensibilidade e baixa relação sinal-ruído. A tendência atual é desenvolver SPECTROFLUOROMETERS uma mudança no sentido de multi desenho do porta-amostras com um máximo de 400 poços para facilitar high-throughput screening ensaios de fluorescência utilizados pelas empresas na descoberta da droga farmacêutica.

Significado

Anisotropia de fluorescência é uma parte de espectroscopia de fluorescência e permite obter a proteína global de caída (rotação) tempo observado de anisotropia. Proteína de rolamento complexo é mais ou menos proporcional ao peso molecular da proteína. Anisotropia permissões de fluorescência para estudar a cinética das interacções proteína-proteína em solução. A associação de duas proteínas leva à sua complexa com um peso molecular substancialmente maior do que o que é caracterizado pelo material mais lento e elevada anisotropia. Anisotropia é monitorizada como uma função da concentração de uma das proteínas.

Especialista introspecção

Têmpera é um conceito importante no espectroscopia de fluorescência e inclui todos os processos que diminuem a intensidade da fluorescência. Prata, iodo, oxigênio molecular são exemplos de supressores. Um após sacia eficientemente todos os fluoróforos conhecidos. O triptofano é um dos aminoácidos e a fluorescência da proteína natural é devido, principalmente, à presença de triptofano. Extinção da fluorescência do triptofano pode ser aplicada ao estudo de transições de proteína a partir de uma forma globular (estado dobrado) para uma prolongada (explicado). Desde uma proteína contém resíduos de triptofano que estão localizados dentro da forma globular, desnaturação de proteínas, resultando em seu estado desdobrado, leva a exposição completa e acessibilidade desses triptofano para quencher.