Testes fundo Fragmento de Restrição Polimorfismo

A chave fundamental do teste de DNA é encontrar as diferenças de seqüências específicas de DNA. Você precisa de duas seqüências de DNA para comparação. Em forense, por exemplo, são muitas vezes as amostras de DNA da cena do crime em relação ao DNA de um suspeito. O primeiro passo para verificar variar dependendo das diferentes técnicas (descritos nas secções seguintes), mas é, basicamente, o isolamento de uma parte de uma sequência de ADN. Os fragmentos de ADN cortados são então classificados por tamanho utilizando electroforese em gel. A mancha do gel é feito para gravar os resultados do gel e a sonda é libertada no blot para localizar e se ligar a uma sequência de ADN semelhante ao associado com a sonda.

Polymerase Chain Reaction

Análise de fragmentos de restrição de polimorfismo de comprimento (RFLP) é uma técnica de isolamento de ADN que é frequentemente utilizada em medicina forense. Em geral, RFLP requer grandes quantidades de DNA alterado, por isso é ideal para as cenas de crime que são novos, com um monte de provas. Depois de ter obtido amostras suficientes, as enzimas de restrição são usadas para isolar uma sequência de DNA conhecida como AATT. Os fragmentos são então correr através de uma electroforese em gel, realizada em uma mancha e sondadas (como mencionado acima). O tamanho dos fragmentos de ADN detectados pela sonda são analisadas e os resultados de cada amostra de DNA são comparados. Muita coisa pode ser declarada se as bandas estão todos dentro de 5 por cento do outro em termos de tamanho.

Importância de curtas Tandem Repeats 

Reacção em cadeia da polimerase (PCR) é outra técnica utilizada para a amplificação de ADN em medicina forense. Ao contrário de RFLP, PCR tem a capacidade de utilizar a informação muito pequeno e também amostras degradadas para amplificar regiões específicas de ADN. PCR utiliza dois pequenos pedaços de ADN conhecidos como iniciadores oligonucleótidos e uma polimerase de ADN termoestável para isolar a região do DNA a ser copiado. As amostras de DNA isoladas são então realizados em eletroforese em gel e excluídos, assim como com RFLP para análise e comparação. Deve-se notar que a contaminação do ADN da amostra é de particular importância na análise por PCR. Se qualquer outro tipo de DNA é a partir de outras pessoas ou coisas, tais como as bactérias estão presentes, muitas cópias de fragmentos de ADN isolados podem ser feitas a partir da fonte errado e dão resultados falsos.

AmpFLP

Repetições curtas em tandem (STR) são pequenas regiões de seqüências repetidas curtas de DNA que variam muito entre os indivíduos não aparentados. Apenas 5 a 20 por cento dos indivíduos compartilham as mesmas sequências repetidas, em seguida, a identificação desta região particular, é muito útil para a identificação de indivíduos. As outras regiões que estão isolados e testados, o mais preciso dos resultados. STR é muitas vezes isolado utilizando PCR, devido aos efeitos de amplificação por PCR.

Multiplex STR

Polimorfismo de comprimento de fragmento amplificado (AmpFLP) é uma técnica que é baseada no número variável de repetições em cadeia (VNTR) para distinguir os alelos, que são diferentes formas de um gene. A PCR é utilizado para amplificar amostras de DNA, que são então executados sobre um gel de poliacrilamida para separar os alelos, em vez de por tamanho como outros testes fazer. Este teste em particular é altamente automatizado e de baixo custo, por isso é bastante popular em países de baixa renda.

Mutliplex STR é um teste que utiliza diferentes STR normalmente encontrado em uma reacção de PCR para testar vários fragmentos ao mesmo tempo. Esta forma de teste é projetado para isolar STR com tamanhos diferentes de STR com formatos sobrepostas aplicação de diferentes corantes para distinguir uma coisa da outra. O ensaio utiliza também tubos capilares e electroferograms vez de electroforese em gel de fragmentos de DNA separados. A vantagem deste tipo de ensaio é resultados rápidos em comparação com outros tipos de ensaios. No entanto, multiplex STR é bastante novo e pode estar sujeito a um excesso de interpretação quando se usa perfis parciais.