Lei de Beer-Lambert

A lei de Beer-Lambert, a qual afirma que a absorvância é proporcional ou tem uma relação linear com a concentração das espécies de absorção, é apenas verdadeiro para a densidade óptica de menos do que 0,4. No entanto, as amostras com densidade óptica superior a 0,4 pode ser diluída com um factor de diluição definida e a sua densidade óptica, medida. Se os valores medidos são divididos pelo factor de diluição, para produzir a densidade óptica corrigida, este novo valor é proporcional ao número de células na amostra.

Espectrofotômetro

A densidade óptica é medida por um instrumento conhecido como um espectrofotómetro, que compara o brilho da luz emitida a partir de duas fontes, uma das quais tem certas características comuns. Quando a luz passa através de uma suspensão de células, a luz é dispersa pelas células de forma a que menos de que ele atinja uma célula fotoeléctrica - um dispositivo electrónico, a potência eléctrica da qual varia de acordo com a intensidade da luz que incide sobre ele - dentro do espectrofotómetro. Portanto, quanto maior o número de células em suspensão, a menor é a energia eléctrica da célula fotoeléctrica, e vice-versa.

Correção densidade óptica 

Em densidades ópticas acima de 0,4, os graus nos quais as células podem ser na sombra de outras células ou de luz reflectem muitas vezes é apreciável. Nas densidades ópticas elevadas, a densidade óptica corrigida de suspensões de células não é directamente proporcional ao número de células. No entanto, a densidade óptica corrigida de suspensões de células diluídas é aproximadamente proporcional às suas densidades relativas conhecidas de ser preciso - a razão entre a sua densidade para o de uma substância de referência, tal como a água - por isso, é uma hipótese de trabalho razoável que o densidade óptica corrigida de uma suspensão de células é altamente diluída, de facto, a sua verdadeira densidade óptica.

Densidade óptica relativa

A multiplicação do valor da densidade relativa de cada suspensão de células a partir do valor de densidade óptica de base obtida a partir de suspensão de células altamente diluído, é possível obter a densidade óptica corrigida. No entanto, para tornar a medida mais precisa possível, o valor base da densidade óptica deve ser obtido a partir de diferentes leituras espectrofotométricas.